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“Berlin Patient” and gene therapy against HIV infection

The case:

Timothy R.B. probably never believed that the same treatment would save him from two different diseases and one of them incurable. He had presented acute myeloid leukemia (FAB M4 subtype) and HIV-1 infection, in the Charité – Universitätsmedizin Berlin (Germany). In the previous 4 years, the patient had been treated with HAART (600 mg of efavirenz, 200 mg of emtricitabine, and 300 mg of tenofovir per day) and no illnesses associated with the acquired immunodeficiency syndrome (AIDS) were observed 1,4,5.

Initial treatment of the acute myeloid leukemia consisted of two courses of induction chemotherapy and one course of consolidation chemotherapy. During the first induction course, severe hepatic toxic effects developed and renal failure occurred. Seven months after presentation, acute myeloid leukemia relapsed, and the patient underwent allogeneic hematopoietic stem-cell transplantation (HSCT) with CD34+ peripheral-blood stem cells from an HLA-identical donor 1,4,5.

Particularly, this donor had been screened for homozygosity for the CCR5 delta32 allele that contains a 32 b.p. deletion, which results in a truncated protein and so generates a non-functional CCR5 receptor phenotype. This chemokine receptor is a cell-surface cofactor for the gp120-CD4 binding, so it is necessary for viral fusion and entry. Some genetic evidence suggests that individuals homozygous for a CCR5 deletion mutation are resistant to HIV infection 1,3,4,5,10,15.

This therapy was described by Eckhard Thiel et al. in “Long-Term Control of HIV by CCR5 Delta32/Delta32 Stem-Cell Transplantation”, on February 12, 2009 in the New England Journal of Medicine 1.

On December 9, 2010 Blood journal pre-published online the article: “Evidence for the cure of HIV infection by CCR5delta32/delta32 stem cell transplantation”, in which the authors showed a reconstitution of CD4+ T cells at the systemic level as well as any sign of HIV infection. The paper quotes: “in conclusion, our results strongly suggest that cure of HIV has been achieved in this patient” 4.

Why gene therapy?

HSCT is used as salvage therapy for patients with malignancies sensitive to chemo-/radiotherapy. These patients receive very dose-intensive cytoreductive regimens designed to eliminate all tumor cells, but the procedure also eliminates the cell substrate necessary to reconstitute the hematopoietic tissue. For this reason it’s require the infusion of HSC (hematopoietic stem cells), that could to reconstitute bone marrow 19.

This therapy presents risks of transplant-related mortality (TRM) due to some complications, as graft-versus-host disease (GvHD), problems derived of inadequate reconstitution of the immune system, the concominant probability of opportunistic infections, and the possibility of malignant relapse. However, the treatment holds great promise as a curative therapy for several tumor types 19, but in the case of HIV infection has insurmountable risks compared with HAART.

Thus, the difficulty in reproducing the therapy is clear, due to the low frequency of the Homozygous Δ32 genotype (1%-3%), the difficulty of finding a matched donor and the problems derived of HSCT. For this reason the application of Gene Therapy seems to be a good option. In this sense I show different approaches that have been made and its possible usefulness in the context of gene therapy against HIV infection.

First of all, I consider myeloablative treatment very important according to the elimination of the reservoirs and infected cells 18, especially having in mind that CCR5 Δ32/Δ32 homozygous does not mean a complete resistance to the HIV infection, due to the presence of CXC4-tropic HIV-1 or dual-tropic. In case of a positive selection of this variant, which normally shows a low frequency (in this patient it was 2.9%) 1,4,5, there are plenty of therapeutic approaches. For instance, the drug AMD3100 8,13 or a siRNA system such the one developed by RJ Pomerantz et al.9, which was quite remarkable. Nevertheless, the importance of this receptor in multiple events (immunomodulation, hematopoiesis, organogenesis and cerebellar neural migration) must be considered 9,10, because inhibition may mean a risk. For this reason, according to its low frequency, the complete reduction of its reservoirs and the stimulation of the Immune System to avoid its reseeding may turn out as a solution 1.

Also, the importance of the anti-HIV myeloablative therapy (although the low success rate raised by I. Huzicka F.18) was shown in two cases in which the DNA/RNA viral detection was negative. It was co-related to an intense pre-transplant cytoablative conditioning (Holland et al. & Contu et al.). The fact of reconstituting the immune system means an opportunity to generate a powerful response to an exhaustive viral burden, similar to the acute infection context 11,12,18. For this reason I think it may be interesting to isolate, stimulate and activate part of the innate immune component (IFN and NK cells) and T cytotoxic of the patient, in order to enhance the innate control events of viremia described in the next image 11,12.

 

Gene therapy for CCR5 Δ32/Δ32 phenotype generation:

June et al., by using engineered zinc-finger nucleases to disrupt endogenous CCR5 co-receptor in NOG mouse model, generated a robust and stable HIV-resistance genotype, both in vitro and in vivo, which increased the TCD4+ cells recount and reduced viremia (8300 copies/ml) compared with the control (60100 copies/ml). This technology can be designed to make a single break at a specific site in double-stranded genomic DNA, permanently modifying the genome via an imperfect repair by nonhomologous end joining (NHEJ). In this work mice were engrafted with ZFN-modified T CD4+ and showed the previously described results. This technology was also used on human primary T CD4+ cells, obtaining an efficacy and tolerability profile. For this reason an interesting clinic application is proposed 3.

In this context, it may be interesting to consider this technology for autologous CD34+ cells, in order to reconstitute an immune system with phenotype similar to the CCR5 Δ32/Δ32, via autologous stem cells. T cells transfection was accomplished by an adenovirus vector (Ad5/35) that encodes CCR5 ZFNs 3.

Naldini et al. tested the effectivity of the integrase defective lentiviral vectors to allow site specific gen addition through a process which required ZFN break and an homologous DNA template. This approach was carried out, for instance, in CD34+ cells incorporating a GFP cassette at the CCR5 site. Two different experiments showed an addition of the GFP cassete into the CCR5 locus in 80%-90% of the colony-forming cells analyzed 14. Therefore, another possible approach would be the insertion of a transgene in the CCR5 locus, to deplete its expression and thus generate a resistance phenotype to CCR5-tropic HIV-1.

One of the greatest advantages of this system is that it modifies the genotype of the cell without the need of integrating an alien DNA inside the genome since the expression systems used in this work  transiently expressed CCR5 ZFN. According to this, the use of integrative viral vectors which are related to insertional mutagenesis, becomes unnecessary 14,16.

Quoting Naldini et al.’s 14 paper: Gene correction overcomes the major limitations of gene- replacement strategies, as it restores both the function and expression control of the affected gene and avoids the risks associated with semi-random vector integration.

Aubourg et al. implemented a gene therapy in two patients with no matched bone marrow donors. It consisted in isolating CD34+ cells –from peripheral blood mononuclear cells stimulated with granulocyte colony-stimulating factor– by positive selection (with a immunomagnetic technique), and activate them with a mixture of citokines. Then, the cells got infected by replication-defective HIV-1–derived lentiviral vector (CG1711 hALD), which expressed a cDNA of the wild-type ABCD1 gene, which encodes the ALD protein. Transfected cells were then re-infused in both patients after a fully myeloablative conditioning regime with cyclophosphamide and busulfan. The process was clinically uneventful. Also, some months after both patients showed a clinical outcome improvement, similar to the one achieved by allogeneic HCT 2.

I believe that this therapy, through an ex-vivo CCR5 gene alteration, may be very interesting in order to reconstitute an hematopoietic system with a CCR5 Δ32/Δ32 phenotype. Nevertheless, while the aim in the X-linked Adrenoleukodystrophy case was the insertion of a wild-type gene 2, in the VIH resistance case it is necessary just the opposite thing. Hereby the combination of the successful Aubourg et al. approach 2 with the expression of siRNA system against CCR5 expression may turn out useful. Baltimore et al.  constructed a lentivirus-based vector to introduce siRNAs against CCR5 in peripheral blood T lymphocites. This system conferred an important protection against CCR5-tropic HIV-1 infection in these cells 15. However there are problems regarding the integrative viral vectors previously described, as the difficulties with large-scale manufacture in relation to the use of integrative viral vectors in clinical setting 6,17. Before this possible context, nonviral carriers which deliver native siRNA could also be considered, because they generate low immunogenicity and offer high structural and functional tunability 6.

I think all these approximations should be considered, as the continuous progress in correction and gene replacement system, in order to achieve the generation of a HIV resistance phenotype through an autologous HCT. The valuation of the advantages and disadvantages of different systems is necessary though, and particularly its long-term efficacy. For this reason it is also important employing a mouse model with a functional human immune system and an optimal HIV-1 infection profile. Since the major focus of Thiel at al.’ therapy is immune system reconstitution with HIV resistant phenotype, a mouse model which could accept efficient human HSC engraftment should be used. There is a model, the Rag2-/-gammaC-/- double knockout (DKO) mouse, which lacks T, B lymphocytes and NK cells, and in which the injection of CD34+ human HSC directly into the liver of new born DKO mice allows an efficient engraftment, and a reconstitution of the mouse with a functional human immune system in central and peripheral lymphoid organs 7. Using it may be interesting to value the reconstitution with a modified human HSC that expresses CCR5 Δ32/Δ32 phenotype.

Despite advances in gene therapy, this approach is very complicated and therefore in HIV infection would not be a feasible alternative to HAART, actually. However, I consider it an option to develop, especially in cases which HAART is not effective.

References:

  1. Gero Hütter, Daniel Nowak, Maximilian Mossner, Susanne Ganepola, Arne Musig, Kristina Allers, Thomas Schneider, Jorg Hofmann, Claudia Kucherer, Olga Blau, Igor W. Blau, Wolf K. Hofmann, Eckhard Thiel. Long-Term Control of HIV by CCR5 Delta32/Delta32 Stem-Cell Transplantation. New England Journal of Medicine. 2009; 360:692-8.
  2. Cartier N, Hacein-Bey-Abina S, Bartholomae CC, Veres G, Schmidt M, Kutschera I, Vidaud M, Abel U, Dal-Cortivo L, Caccavelli L, Mahlaoui N, Kiermer V, Mittelstaedt D, Bellesme C, Lahlou N, Lefrère F, Blanche S, Audit M, Payen E, Leboulch P, l’Homme B, Bougnères P, Von Kalle C, Fischer A, Cavazzana-Calvo M, Aubourg P. Hematopoietic stem cell gene therapy with a lentiviral vector in X-linked adrenoleukodystrophy. Science. 2009; 326(5954):818-23.
  3. Perez EE, Wang J, Miller JC, Jouvenot Y, Kim KA, Liu O, Wang N, Lee G, Bartsevich VV, Lee YL, Guschin DY, Rupniewski I, Waite AJ, Carpenito C, Carroll RG, Orange JS, Urnov FD, Rebar EJ, Ando D, Gregory PD, Riley JL, Holmes MC, June CH. Establishment of HIV-1 resistance in CD4+ T cells by genome editing using zinc-finger nucleases. Nature Biotechnology. 2008; 26(7):808-16.
  4. Allers K, Hütter G, Hofmann J, Loddenkemper C, Rieger K, Thiel E, Schneider T. Evidence for the cure of HIV infection by CCR5{Delta}32/{Delta}32 stem cell transplantation. Blood. 2010.
  5. Hütter G, Thiel E. Allogeneic transplantation of CCR5-deficient progenitor cells in a patient with HIV infection: an update after 3 years and the search for patient no. 2. AIDS. 2011; 25(2):273-4.
  6. Shim MS, Kwon YJ. Efficient and targeted delivery of siRNA in vivo. FEBS J.2010; 277(23):4814-27.
  7. Zhang L, Meissner E, Chen J, Su L. Current humanized mouse models for studying human immunology and HIV-1 immuno-pathogenesis. Sci China Life Sci. 2010; 53(2):195-203.
  8. Kuritzkes DR. HIV-1 entry inhibitors: an overview. Current Opinion in HIV and AIDS. 2009; 4(2):82-87.
  9. Zhou N, Fang J, Mukhtar M, Acheampong E, Pomerantz RJ. Inhibition of HIV-1 fusion with small interfering RNAs targeting the chemokine coreceptor CXCR4. Gene Therapy. 2004; 11(23):1703-12.
  10. Mahalingam S, Karupiah G. Chemokines and chemokine receptors in infectious diseases. Immunology and Cell Biology. 1999; 77(6):469-75.
  11. Chang JJ, Altfeld M. Innate immune activation in primary HIV-1 infection. J InfectDis. 2010; 202 Suppl 2:S297-301.
  12. Chakrabarti LA, Simon V. Immune mechanisms of HIV control. Curr Opin Immunol. 2010;22(4):488-96.
  13. Hatse S, Princen K, Bridger G, De Clercq E, Schols D. Chemokine receptor inhibition by AMD3100 is strictly confined to CXCR4.FEBS Lett. 2002; 527(1-3):255-62.
  14. Lombardo A, Genovese P, Beausejour CM, Colleoni S, Lee Y, Kim KA, Ando D, Urnov FD, Galli C, Gregory PD, Holmes MC, Naldini L. Gene editing in human stem cells using zinc finger nucleases and integrase-defective lentiviral vector delivery. Nat Biotechnol. 2007 Nov;25(11):1298-306. Epub 2007 Oct 28.
  15. Xiao-Feng Qin, Dong Sung An, Irvin S. Y. Chen, David Baltimore. Inhibiting HIV-1 infection in human T cells by lentiviral-mediated delivery of small interfering RNA against CCR5. PNAS. 2003 Jan; 7(100): 183-88.
  16. Escors D, Breckpot K. Lentiviral Vectors in Gene Therapy: Their Current Status and Future Potential. Arch. Immunol. Ther. Exp. (2010) 58:107–119.
  17. Couto LB, High KA. Viral vector-mediated RNA interference. Current Opinion in Pharmacology 2010, 10:534–542.
  18. I. Huzicka. Could bone marrow transplantation cure AIDS?: review. Medical Hypotheses 1999; 52(3): 247–257.
  19. Rich RR, Fleisher TA, Shearer WT, Schroeder HW, Frew AJ, Weyand CM. Clinical Immunology. Principles and Practices. Third edition. Mosby Elsevier; 2008.
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“No es magia, es marketing”

25 abril, 2010 46 comentarios

Ayer apareció un artículo en  El PAÍS con el título “Doctor, recete este yogur”1que hablaba de la actual polémica sobre la promoción de algunos productos alimentarios, los llamados probióticos, que supuestamente mejorarían la salud y el bienestar de sus consumidores. Los probióticos se han puesto muy de moda con el interés creciente en lo que yo tildaría de “salud fácil”, consistente en consumir productos que protegen nuestra salud del día a día y en los que la gente deposita su confianza al ritmo del comercial “no es magia, es ciencia”.

El artículo me ha parecido interesante a la vez que tranquilizador porque asegura que las agencias de salud europeas están comenzando a endurecer los controles a estos productos y muy especialmente a regular su publicidad. Por fin parece que la ciencia se va a imponer sobre el duro marketing que desde hace pocos años nos bombardea con alimentos ricos en Omega 3, antioxidantes o bacterias que regulan nuestra flora. Por los datos citados se deduce que la situación comenzaba a ser alarmante:La agencia europea comienza a emitir dictámenes y los resultados son demoledores. El 80% de los anuncios de más de 1.000 peticiones analizadas para alegaciones genéricas ha sido rechazada1, y lo que queda…

Para analizar más en profundidad toda esta polémica hablaré sobre uno de los probióticos estrella que seguro conoceréis, el famoso Activia de Danone. Para ello introduciré un poco en qué consiste el producto así como la evidencia científica que he podido extraer de, en mi opinión, una limitada publicación científica disponible. Pongo además a vuestra disposición toda la bibliografía referenciada.

En una demanda judicial en Los Ángeles del 25 de Enero de 2008, en contra de Dannon (Danone en EEUU) se objetaba que los estudios no corroboraban lo que afirmaba la empresa sobre los efectos de algunos de sus productos 2. Uno de los productos incluidos en la demanda era el denominado Activia, que en España se ha publicitado de manera bastante agresiva en 6 campañas televisivas y en numerosos medios de comunicación. Activia es un yogur probiótico producido por la empresa Danone en más de 30 países i que contiene de forma característica la bacteria Bifidobacterium animalis, subespecie lactis, cepa DN173 010 3.

El género Bifidobacterium contiene bacterias anaerobias de tipo gran positivo, con más de 30 especies i que de manera habitual habitan el tracto gastrointestinal de mamíferos como bacterias comensales. En humanos se han aislado hasta 11 especies de Bifidobacterium, dentro de las cuales no se ha encontrado B.animalis 8. Esta última especia ha tomado interés en los alimentos funcionales por presentar una elevada capacidad de supervivencia en el tracto digestivo humano sin colonizarlo 7, además de por qué algunos estudios han evidenciado que su consumo puede aportar efectos beneficiosos para la regulación del tránsito i la flora intestinal, tanto en condiciones de salud como de enfermedad 4,5,6,7,9,10,11,12,13.

En sujetos que no presentaban ningún desorden gastrointestinal los estudios realizados hasta ahora se han centrado en la duración del tránsito intestinal i la frecuencia de deposiciones, así como en el grado de confort digestivo 4,5,6,11,12,13. En el primer caso todos los estudios eran similares i tenían un diseño de doble ciego (menos los artículos 11, 12 y 13), donde un grupo de individuos consumía diariamente un producto lácteo fermentado con B. lactis DN173 010 i el grupo control un lácteo que no presentaba esta bacteria. Los estudios, que duraban 14 4,11,12,13, 40 5 y 116 días, concluían que el consumo de esta bacteria disminuía significativamente el tiempo de tránsito colónico un 20.6-21% 6,13, especialmente en mujeres 4,5,6,12,13 i más marcadamente en aquellas con un tránsito inicial de >40 h 4,5. Además, el número de deposiciones aumentaba significativamente en uno estudio 4 y no presentaba cambios en otro 5. En el segundo caso, el estudio concluía que el 82.5-84.3% de los participantes que consumieron la bacteria regularmente durante 14 días reportaban un mayor confort digestivo respecto el grupo control 1.

Por otro lado, los estudios con personas que presentan trastornos gastrointestinales se han centrado en los posibles beneficios de B. lactis DN173 010 en la constipación funcional 10 i en la asociada al Síndrome de Colon irritable 9. En ambos estudios se dice que la aceleración del tránsito intestinal resultante del consumo de lácticos fermentados con la cepa de Bifidobacterium mejora los síntomas: en el Síndrome de Colon irritable disminuiría la distensión abdominal i la sensación de hinchazón 9, mientras que en la constipación aumentaría la frecuencia de defecación y la consistencia de las heces 10.

Además, análisis bioquímicos han aportado evidencia de actividades enzimáticas de B. lactis DN173 010 que optimizan la inmunidad i previene de procesos neoplásicos:

  • Estimula la producción de IgA anti-rotavirus, mejorando la respuesta inmunológica durante la diarrea infantil causada per este virus 7.
  • Presenta actividad β-fructofuranosidasa y β-galactosidasa in vitro e in vivo en ratas; siendo ambas actividades enzimáticas marcadores positivos de la salud del colon 7.
  • Pueden realizar la bioconversión de aminas heterocíclicas, que son potentes carcinógenos del colon, así como disminuir su producción 7.
  • Contribuyen a la actividad Sal biliar hidrolasa dentro del tracto gastrointestinal de cerdos, de manera que se ha observado una disminución de la presencia de sales biliares secundarias citotóxicas, como los ácidos biliares no conjugados 7,15. No obstante, los estudios en humanos no aportan un cambio significativo en la excreción de sales biliares secundarias asociada al consumo de la bacteria 5,7.

Ahora bien, no todo son beneficios. Bifidobacterium es uno de los géneros bacterianos más seguros i el riesgo de infección en consumidores sanos a través de la ingesta de productos lácteos que la contienen es extremadamente baja. No obstante, este género, y también específicamente la cepa B. lactis DN173 010, contienen el gen tet (W), que confiere resistencia a tetraciclina 8,14. Este hecho como veremos puede suponer un problema importante.

Teniendo en cuenta los resultados obtenidos por los estudios científicos parece claro que el consumo de productos probióticos con B. lactis DN173 010, como el Danone Activia, facilita el tránsito intestinal tal y como asegura la publicidad. No obstante, antes de quedar “convencidos” recomiendo que se lean el review de Anna Chmielewskai i Hania Szajewska 10, puesto que proporciona una perspectiva crítica con la que me identifico i a la que he querido aportar las conclusiones extraídas de la indagación en el tema.

La resolución a la que llegan las autoras del review es que la evidencia todavía es limitada. Si analizamos la metodología de los estudios que concluyen con los beneficios de consumir B. lactis DN173 010 4,5,6,7.9,10,11,12,13 vemos que el número de participantes es muy reducido (50 4, 36 5, 72 6, 34 9, 371 11, 200 12, 50 13); que algunos estudios utilizan procedimientos poco fiables (11,12 y 13 no hacen uso de doble ciego); que el estudio más largo solo dura 40 días (qué pasa entonces con los efectos del consumo crónico) 10, y un hecho que considero clave, la falta de imparcialidad, dado que los estudios 4,5,6,7,9,11,12 y 13 están patrocinados por Danone y/o han sido realizados en centros de investigación adscritos a la empresa.

Además, aunque el consumo de esta bacteria no supone ningún riesgo para la salud del consumidor, se debería ir con cuidado con la presencia del gen de resistencia a tetraciclina tet (W). Pese a ser mínimo, existe riesgo de transferencia horizontal del gen a patógenos intestinales 14. Es por ello que algunos autores recomiendan la eliminación de esta cepa como probiótico o la inactivación irreversible del gen de resistencia 8.

Así pues, considero la publicidad de Activia poco honesta por parte de Danone, teniendo en cuenta que da una visión muy refutada de los beneficios de consumir Bifidus. Además me resulta descarado el predominio del marketing en detrimento de la realidad científica, puesto que en los productos Activia se refieren a Bifidobacterium animalis DN173010 con el nombre inventadoBifidus ActiRegulari”.

No digo que consumir estos yogures suponga un riesgo para el consumidor, sino que su beneficio real se ha adelantado a la evidencia científica y por tanto no merece el trato publicitario dado por Danone. Así mismo, me sorprende que la comunidad científica haya comenzado tan tarde a analizar estos productos de manera independiente a los intereses económicos de estas empresas; si se fijan los artículos 10 y 14 son los únicos críticos con el consumo de Bifidobacterium animalis DN173010 y ambos han sido publicados en Enero de este año, mientras que los estudios de Danone se publican desde 2001.

Es posible que los probióticos sean en un futuro potentes recursos para tratar trastornos intestinales, inmunológicos y/o nutricionales, no obstante este potencial no debería ampararse al interés de algunas empresas alimentarias, si no al ámbito científico-sanitario. A diferencia de las primeras su trabajo e inversión va dirigida a garantizar la salud de “sus pacientes” y no de “sus consumidores”. Nos encontraríamos pues con un debate abierto similar al de las industrias farmacéuticas, aunque por suerte con menos repercusión socio-económica.

1)http://www.elpais.com/articulo/sociedad/Doctor/recete/yogur/elpepisoc/20100424elpepisoc_1/Tes

2) http://www.pe.com/business/local/stories/PE_Biz_S_webonly19-dannon.3f487f2.html

3) http://www.activia.es

4) Nishida S, Ishikawa Y, Iino H. Effect of Bifidobacterium lactis DN173 010 on the Intestinal Transit Time, the Condition of Defecation and Intestinal Microflora: A Randomized, Doubleblind, Placebo-controlled, Cross-over Study among Healthy Japanese Women. Research and Development Department, Danone Japan Co. Tokyo, Japan. 2009.

5) Marteau P, Cuillerier E, Meance, Gerhardt MF, Myara A, Bouvier M et al. Bifidobacterium animalis strain DN-173 010 shortens the colonic transit time in healthy women: a double-blind, randomized, controlled study [monografia a internet]. Paris: Danone Vitapole, Nutrition Research; 2001 [accés 9 d’abril de 2010]. Disponible en: www.interscience.wiley.com

6) Bouvier M, Meance S, Bouley Ch, Berta JL y Grimaud JC. Effects of Consumption of a Milk Fermented by the Probiotic Strain Bifidobacterium animalis DN-173 010 on colonia Transit Times in Healthy Humans. Bioscience Microflora Vol. 20(2), 43-48, 2001.

7) Picard C, Fioramonti J, Francois A, Robinson T, Neant F, Matuchansky C. Review article: bifidobacteria as probiotic agents – physiological effects and clinical benefits. Aliment Pharmacol Ther 2005; 22: 495–512.

8) Meile L, Blay GL, Thierry A. Safety assessment of dairy microorganisms: Propionibacterium and Bifidobacterium.  International Journal of Food Microbiology 126 (2008) 316–320

9)  Agrawal A., Houghton L.A., Morris J., Reilly B.,D., Guyonnet D., et al. Clinical trial: the effects of a fermented milk product containing Bifidobacterium lactis DN-173 010 on abdominal distension and gastrointestinal transit in irritable bowel syndrome with constipation. Alimentary Pharmacology and Therapeutics. 2009; 29(1): 104-114.

10) Chmielewska A, Szajewska H. Systematic review of randomised controlled trials: Probiotics for functional constipation. World J Gastroenterol 2010 January 7; 16(1): 69-75

11) Guyonnet D, Woodcock A, Stefani B, Trevisan C, Hall C. Fermented milk containing Bifidobacterium lactis DN-173 010 improved self-reported digestive comfort amongst a general population of adults. A randomized, open-label, controlled, pilot study. Journal of Digestive Diseases. 2009; 10: 61–70.

12) Meance S, Cayuela C, Turchet P, Raimondi A, Lucas C, Antoine JM. A fermented milk with a bifidobacterium probiotic strain dn-173 010 shortened oro-fecal gut transit time in elderly. Microb Ecol Health Dis 2001; 13: 217-222.

13) Meance S, Cayuela C, Raimondi A, Turchet P, Lucas C, Antoine JM. Recent Advances in the Use of Functional Foods: Effects of the commercial fermented milk with bifidobacterium animalis strain dn-173 010 and yoghurt strains on gut transit time in the elderly. Microb Ecol Health Dis 2003; 15: 15-22.

14) Gueimonde M, Flórez AB, van Hoek AH, Stuer-Lauridsen B, Strøman P, de Los Reyes-Gavilán CG, Margolles A. The genetic basis of tetracycline resistance in Bifidobacterium animalis subsp. lactis. Appl Environ Microbiol. 2010.

15) Lepercq P. Bifidobacterium animalis strain DN-173 010 hydrolyses bile salts in the gastrointestinal tract of pigs.Scand J Gastroenterol 2004; 39: 1266–71.

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Agradecimientos a mis compañeros del grupo 2 de microbiología de la UPF, por aportar la información y la bibliografia necesaria para editar esta entrada. Asímismo en nuestros blogs recomendados añado el blog de microbiología del curso de biología 2009/10 de la UPF, donde encontrareis artículos sobre diversos temas de actualidad relacionados con el ámbito de la microbiología.